外泌体分离试剂盒

人间充质干细胞外泌体激活剂产品说明

产品概述

       人间充质干细胞外泌体激活剂，是为从人间充质干细胞培养上清中收获外泌体而特设的试剂。使用该试剂刺激间充质干细胞96小时后，细胞释放外泌体数量增加3倍以上。该试剂主要由细胞因子组合组成，500μl/管/包装，宜置于-20°C以下储存。不宜反复冻融，以免活性丢失。该试剂为1000x，待细胞密度达到80%融合时，换用基础培养基，并加入外泌体激活剂（1μl/ml），继续培养96小时后收获培养上清即可。

产品规格

外泌体分离试剂盒操作说明

材料

        1. 外泌体分离试剂（25 ml/瓶，4 °C避光储存）

        2. 细胞培养上清或体液

        3. PBS、生理盐水或其他平衡盐溶液

方法

        1. 细胞培养上清及体液的处理

       （1） 收集细胞培养上清或体液，室温条件下离心2000 g，10 min，去除细胞碎片。

       （2） 将培养上清或体液分别经过直径为1 µm、0.45 µm及0.22 µm滤膜过滤，以去除其中可能存在的凋亡小体。

注：如不经过滤，可能存在的凋亡小体将被沉淀并混杂于外泌体中，其中的基因组DNA含量很高，将影响外泌体沉淀的溶解，并影响后续实验。

       （3） 立即按照以下步骤处理。

注：4 °C储存72 h，培养上清或体液中的大部分外泌体将被降解。如不能及时处理，建议将已经离心及过滤的标本，置于-80 °C储存。

        2. 外泌体分离

       （1） 取50 ml离心管，加入外泌体分离试剂10 ml。

       （2） 加入经过处理的细胞培养上清40 ml，充分混匀。

       （3） 置于4 °C过夜，或至少6 h。

       （4） 离心，2000 g，30 min。

       （5） 移除液体，再次离心，2000 g，5 min。

       （6） 用pipette小心吸除残留液体，请勿接触沉淀。

       （7） 加入PBS 500 µl至1 ml。

       （8） 测定蛋白质浓度，或进行流式细胞学分析。

       （9） 分装，并将剩余标本置于-80 °C储存。